Vírus opičích kiahní v reálnom čase PCR Kit

1. UkážkaZbierka:Vzorka by sa mala odoberať do sterilných skúmaviek podľa toho

so štandardnými technickými špecifikáciami.

2. Príprava činidla (oblasť prípravy činidla)

Vyberte komponenty súpravy, vyvážte ich pri izbovej teplote pre pohotovostné použitie.

3. Spracovanie vzoriek (oblasť spracovania vzoriek)

3.1 Extrakcia nukleových kyselín

Odporúča sa odobrať 200 μl tekutých vzoriek, pozitívnej kontroly a negatívnej kontroly na extrakciu nukleovej kyseliny, podľa zodpovedajúcich požiadaviek a postupov súprav na extrakciu vírusovej DNA.

3.2 Rozpustenie lyofilizovaného prášku a pridanie templátu

Pripravte lyofilizovanú premix vírusu Monkeypox podľa počtu vzoriek.Jedna vzorka potrebuje jednu skúmavku PCR obsahujúcu lyofilizovaný prášok premixu.Negatívna kontrola a pozitívna kontrola by sa mali považovať za dve vzorky.

(1) Pridajte 15 μl rozpúšťacieho roztoku do každej skúmavky PCR obsahujúcej lyofilizovaný premix, potom pridajte 5 μl extrahovaných vzoriek/negatívnej kontroly/pozitívnej kontroly do každej skúmavky PCR.

(2) Skúmavky PCR pevne zakryte, skúmavky PCR pohybujte rukou, kým sa lyofilizovaný prášok úplne nerozpustí a nezmieša, kvapalinu odoberte na dno skúmaviek PCR okamžitou nízkorýchlostnou centrifugáciou.

(3) Ak na detekciu používate bežný prístroj PCR v reálnom čase, preneste skúmavky PCR priamo do oblasti amplifikácie;ak na detekciu používate BTK-8, potom je potrebné vykonať nasledujúce operácie: preneste 10 μl tekutiny z PCR skúmavky do jamky na reakčný čip BTK-8.Jedna skúmavka PCR zodpovedá jednej jamke na čipe.Počas pipetovania sa uistite, že je pipeta vertikálna o 90 stupňov.Špičky pipiet s aerosólovou bariérou by sa mali umiestniť do stredu nádobky miernou silou a prestať tlačiť na pipetu, keď dosiahne prvý prevodový stupeň (aby sa predišlo bublinám).Po naplnení jamiek vyberte membránu s reakčným čipom, ktorá zakryje všetky jamky, a čip sa potom prenesie do oblasti detekcie amplifikácie.

4. PCR amplifikácia (oblasť detekcie)

4.1 Vložte skúmavky PCR/reakčný čip do reakčnej nádoby a nastavte názvy každej reakčnej jamky v zodpovedajúcom poradí.

4.2 Nastavenia fluorescencie detekcie: (1) Vírus opičích kiahní (FAM);(2) Vnútorná kontrola (CY5).

4.3 Spustite nasledujúci cyklovací protokol

Protokol ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

 Protokol BTK-8:

5. Analýza výsledkov (pozrite si používateľskú príručku k prístroju）

Po reakcii sa výsledky automaticky uložia.Kliknite na „Analyze“ na analýzu a prístroj automaticky interpretuje hodnoty Ct každej vzorky v stĺpci výsledkov.Výsledky negatívnych a pozitívnych kontrol musia byť v súlade s nasledujúcim "6. Kontrola kvality".

6. Kontrola kvality

6.1 Negatívna kontrola: Žiadne Ct alebo Ct>40 v kanáli FAM, Ct≤40 v kanáli CY5 s normálnou amplifikačnou krivkou.

6.2 Pozitívna kontrola: Ct≤35 v kanáli FAM s normálnou krivkou amplifikácie, Ct≤40 v kanáli CY5 s normálnou krivkou amplifikácie.

6.3 Výsledok je platný, ak sú splnené všetky vyššie uvedené kritériá.V opačnom prípade je výsledok neplatný.

Interpretácia výsledkov

Možné sú nasledujúce výsledky:

POZNÁMKA: Ak sa vyskytne neplatný výsledok, vzorku je potrebné odobrať a znova otestovať.